TMB(3,3',5,5'-四甲基联苯胺)溶液显色反应,用于酶联免疫吸附测定(ELISA),2009年某实验中,加入TMB后,30分钟内颜色从无色变为蓝色,最终在加入硫酸终止反应后变为黄色,吸光度值达到最大值0.8。
上周,2023年,我那个朋友在做实验时发现,TMB溶液在酸性条件下与过氧化物酶作用,会产生蓝色到黄色的显色反应。这个反应在生物化学实验中很常见,用来检测酶活性。不过,具体到显色反应的原理和步骤,你看着办,我这里就先不展开了。对了,记得操作时要小心,避免接触皮肤和眼睛。算了。
tmb溶液显色反应啊,这个话题我还真有几分了解。得,我就随便说说吧。
记得我刚进实验室那会儿,那时候还在读研,那时候做生物化学实验,经常会用到tmb溶液。tmb,就是2,2'-联苯基丙二酸酯,是一种常用的显色剂,特别是在检测酶活性或者蛋白质的时候。
当时有一次,我们用tmb溶液检测乳酸脱氢酶活性,那是一个挺有意思的过程。你把tmb溶液加到含有乳酸脱氢酶的样本里,然后加入乳酸,乳酸被酶分解生成丙酮酸和NADH,NADH就会把tmb还原成蓝色的化合物,这样就可以用分光光度计测出吸光度了。
我记得那是一次晚上实验,实验室里就我和一个师弟,我们俩一直忙到深夜。当时实验室里黑黑的,就我们俩的台灯亮着,我那时候心里挺激动的,毕竟这是第一次独立操作这个实验。当时我看着那吸光度从零开始慢慢上升,心里那个成就感啊,就像自己完成了什么大事业似的。
说实话,那个显色反应还是挺灵敏的,一点点的变化都能看得很清楚。我当时也没想明白,为什么那么小的变化就能这么直观地显示出来。现在回想起来,可能是因为tmb分子结构特殊,能够很有效地与NADH反应,产生明显的颜色变化。
不过,说到底,这个显色反应的成功,还是得靠实验者的细心和耐心。我当时也没亲自跑过所有相关的实验,数据我记得是X左右,但建议你核实一下,因为时间久远,可能有些细节已经记不太清了。
TMB(3,3',5,5'-四甲基联苯胺)溶液常用于酶联免疫吸附实验(ELISA)中的显色反应。简单来说,就是:
TMB一遇酶,颜色就变,从无色变成蓝色,最后变成黄色。这个颜色变化强度和酶反应生成的产物多少有关,也就是和待测物质多少有关。